流式細胞凋亡
2019.08.15
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1、實驗原理(細胞凋亡檢測的方法很多,我們采用的哪種?Annexin V/PI雙染法嗎)

     細胞凋亡(Cell apoptosis)是指爲維持内環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡,亦稱爲程序性細胞死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,它并不是病理條件下的損傷,而是爲更好地适應生存環境而主動争取的一種死亡過程。

     Annexin V(或 Annexin A5)爲胞内蛋白膜聯蛋白家族成員,以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結合。PS存在于正常細胞漿膜的内層,但在凋亡早期,膜不對稱性喪失,PS 易位至細胞表面。熒光标記的 Annexin V可與之特異性結合,表明該細胞爲凋亡細胞。


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機械損傷(Q1):細胞膜破損嚴重,Annexin V-APC染不上。

晚期凋亡(Q2):細胞膜已經受損,7-AAD(ECD-A)與Annexin V-APC染料可以進入細胞内與DNA結合,不可逆轉。

早期凋亡(Q3):細胞隻有磷脂酰絲氨酸PS外翻,細胞膜完整,對7-AAD(ECD-A)拒染,可逆轉

活細胞(Q4):對Annexin V-APC和7-AAD(ECD-A)都拒染


2、技術應用

     檢測藥物、基因或蛋白等對細胞凋亡的影響。

3、實驗步驟

     1.細胞培養及種闆;2.收集細胞及計數;3.孵育染料;4.流式細胞儀檢測;5. Flowjo分析結果

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4、實驗步驟

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客戶提供:細胞株(凍存株或培養細胞)及處理用的藥物,細胞培養基信息,細胞特殊處理方式

HYY提供:原始圖片、流式原始數據,完整實驗報告




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