MicroRNA (miRNA) 是一類由内源基因編碼的長度約爲22 個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，它們在動植物中參與轉錄後基因表達調控。到目前爲止， 在動植物以及病毒中已經發現有28645個miRNA 分子 。大多數miRNA 基因以單拷貝、多拷貝或基因簇(cluster) 的形式存在于基因組中 。

       環狀RNA（circRNA）是一類特殊的非編碼RNA分子（在活體中有時也有表達），也是RNA領域最新的研究熱點。早在 20 世紀八十年代即有研究報道，但由于它們表達豐度低，文獻報道較少，一直被認爲是 RNA 轉錄剪切的罕見錯誤而被忽視。circRNA分子呈封閉環狀結構，不受RNA外切酶影響，表達更穩定，不易降解。在功能上，近年的研究表明，circRNA分子富含microRNA（miRNA）結合位點，在細胞中起到miRNA海綿（ miRNA sponge）的作用，進而解除miRNA對其靶基因的抑制作用，升高靶基因的表達水平；這一作用機制被稱爲競争性内源RNA（ceRNA）機制。通過與疾病關聯的miRNA相互作用， circRNA在疾病中發揮着重要的調控作用。

       LncRNA是長度大于 200 個核苷酸的非編碼 RNA。研究表明, lncRNA 在劑量補償效應(Dosage compensationeffect)、表觀遺傳調控、細胞周期調控和細胞分化調控等衆多生命活動中發揮重要作用，成爲遺傳學研究熱點

       表達載體（Expression vectors）就是在克隆載體基本骨架的基礎上增加表達元件（如啓動子、RBS、終止子等），使目的基因能夠表達的載體。表達載體分爲慢病毒載體與非慢病毒載體。以下主要介紹慢病毒載體：

原理：

       将外源基因片段插入到慢病毒載體的多克隆位點。慢病毒載體可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、内皮細胞、幹細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果。對于一些較難轉染的細胞， 如原代細胞、幹細胞、不分化的細胞等，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉染效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實現目的基因或目的shRNA的長期、穩定表達。

技術路線：

1. 目的基因調取。

2. 慢病毒載體插入目的基因。

3. 轉化培養。

4. 克隆篩選及鑒定。

5. 無内毒素質粒提取。

客戶需提供：

1. miRNA、LncRNA、circRNA信息。如：已知NCBI編号，基因序列。

2. cicrRNA需提供環化位點信息。

我們的服務：

1. 基因合成。

2. 載體設計。

3. 過表達構建及鑒定報告。

4. 出貨質粒，甘油菌。

5. 載體更換。

6. cDNA文庫制備。

LncRNA及miRNA慢病毒過表達圖譜                                  CircRNA慢病毒過表達圖譜