熒光定量PCR（realtime PCR）檢測，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信号積累實時監測整個PCR進程，最後通過标準曲線對未知模闆進行相對定量分析的方法。熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，到21世紀初已得到廣泛應用。

RT-qPCR包括三部分：

1、依靠逆轉錄酶将RNA轉變成cDNA；

2、用PCR擴增cDNA；

3、實時監測和定量測定cDNA的量。

原理:

       RT-qPCR在單管PCR的擴增和測定過程結合使用熒光指示染料。含量的測定依賴于測定增加的熒光信号，其強度與每一次PCR循環的産物量成正比。此外，在單次反應中，用不同染料标記的探針能夠監測和定量多标記的目的基因。在一次循環中，單次PCR熒光第一次超過既定的或背景熒光阈值，這個參數就是稱爲循環阈值（Ct）或交叉點（Cp）。其實濃度越高，Ct值越小。當維持PCR分析滴定終點敏感性和特異性時，這種熒光強度和擴增的相關性使目的基因能夠在一個較大的範圍内被精确定量。

qPCR擴增曲線圖

技術路線：

1. 引物設計。

2. RNA提取及驗證。

3. RT-PCR。

4. qPCR實驗及跑膠驗證。

5. 數據統計分析。

客戶需提供：

1. 靶基因信息。如：已知NCBI編号，基因名稱。

2. 細胞、組織、血液等待檢測樣本。

我們的服務：

1. 引物設計及合成服務。

2. RNA提取及驗證服務。

3. RT-qPCR實驗數據分析報告。