中國醫科大學最近發表了一篇7分的文章，

我們一起來學習一下吧~

《LINC00665可以被TAF15S延長半衰期，并通過STAU1介導的mRNA降解阻止了膠質瘤細胞的癌變》

爲了尋找神經膠質瘤中lncRNA及其有關的治療靶标，作者從臨床樣本和癌細胞株的RNA表達譜中篩選到了一批神經膠質瘤的差異表達基因，通過數據庫篩選和軟件預測了這些基因之間的結合位點。RNA-IP、ChIP和雙熒光素酶機制實驗驗證了互作關系，RNA和蛋白的表達也做了基因之間的調控關系。最後，通過動物實驗驗證了lncRNA相關的3個基因組合抑癌效果最優，具有成爲治療靶标的價值。

01、文章亮點

通過引入了一個轉錄後調控的關鍵蛋白——STAU1，把lncRNA調控下遊轉錄因子的關系串聯在一起；lncR665可以被上遊的TAF15調控，同時lncR665調控轉錄因子MTF1和YY2的降解。

02、涉及的調控機制

✦ TAF15可以延長lncR665的半衰期；

✦ lncR665可以與促癌基因YY2和MTF1轉錄因子結合配對；

✦ lncR665在雙鏈RNA結合蛋白STAU1的幫助下，lncR665可以使YY2和MTF1的mRNA降解；

✦ YY2和MTF1是細胞周期蛋白GSTE1的轉錄因子，YY2和MTF1啓動GSTE1的表達；

調控機制圖

03、實驗思路

➀發現抑癌基因TAF15(轉錄因子)

      

圖1A-C正常組織/正常細胞相比，腫瘤的TAF15表達水平更低，腫瘤分級越高，TAF15越低。

補充圖1a：TAF15低表達患者組生存期更短。

➁ 發現抑癌基因lncR665

補充圖2：lncRNA表達譜分析：癌細胞比正常細胞的lncR665表達水平更低，TAF15高表達細胞株的lncR665表達水平也更低。

圖1 D：FISH定位，看正常細胞比腫瘤細胞的lncR665（紅色）更多；

圖1 E：QPCR水平，看正常細胞比腫瘤細胞 lncR665表達更多；

圖1 F：cck8檢測，腫瘤細胞過表達TAF15增殖下降，腫瘤細胞過表達lncR665增殖下降， 腫瘤細胞同時過表達TAF15和 lncR665，增殖進一步下降。

圖1 G：凋亡檢測，圖1 H：細胞侵襲

腫瘤細胞過表達TAF15凋亡增加，侵襲減少，

腫瘤細胞過表達lncR665凋亡增加，侵襲減少， 

腫瘤細胞同時過表達TAF15和 lncR665，凋亡進一步增加，侵襲減少。

➂ TAF15與lncR665存在相互作用

          

圖2 A：QPCR檢測，腫瘤細胞過表達TAF15，lncR665增加； 

圖2 B：RNA IP+QPCR檢測，腫瘤細胞 TAF15可以與lncR665共沉澱； 

圖2 C：RNA pulldown+WB檢測，腫瘤細胞 lncR665可以pull down TAF15； 

圖2 D：新生RNA捕獲 + QPCR檢測，腫瘤細胞過表達TAF15，新生lncR665不變； 

圖2 E：RNA聚合酶抑制劑+QPCR檢測，腫瘤細胞過表達TAF15， lncR665 半衰期延長； 

➃ 發現MTF1和YY2是促癌基因

➄ STAU1和lncR665、MTF1(轉錄因子)和YY2(轉錄因子)存在調控關系

圖3A-B：在QPCR和WB水平，lnR665過表達時，MTF1減少；STAU1過表達時，MTF1增加；lnR665和STAU1同時過表達時，MTF1恢複。

圖3C：RNA IP+QPCR檢測，STAU1可以拉取lncR665或MTF1。

圖3D：雙熒光素酶檢測，lncR665結合MTF1的3’UTR 。

圖3EQPCR檢測lncR665使MFT1半衰期縮短，STAU1使MFT1半衰期縮短延長； 

圖3G-Icck8、凋亡、侵襲實驗，腫瘤細胞過表達MTF1，可以挽救LncR665的抑癌作用。

➅ 預測并驗證MTF1和YY2可以啓動細胞周期蛋白GTSE1的轉錄

圖7A：生信預測+ChIP+PCR驗證MTF1結合GTSE1的啓動子區；

圖7B-C：敲除或過表達MTF1細胞株，QPCR和WB驗證，MTF1和GTSE1有正相關趨勢；

➆ 生信分析臨床數據驗證發現MTF1、YY2和GTSE1高表達都與預後不良相關

➇ 體内驗證TAF15+lncR665+MTF1-或YY2- 3個組合的抑癌效果最優

圖8 A-C :TAF15+或lnc665+都是抑癌；MTF1-或YY2-都是抑癌；TAF15+lncR665+MTF1-或YY2-抑癌效果最優。

⑨ 體内驗證GTSE1-也有明顯抑癌效果

注：爲了方便理解，以上按照作者的推測标出了抑癌基因和促癌基因）

04、點評

以lncR665爲中心，研究者講明了臨床預後有關的分子TAF15-lncR665-MTF1/YY2-GTSE1通路。美中不足的是，研究者沒有lncR665差異表達的臨床預後分析結果，而且在其他腫瘤類型中，lncR665是促癌基因，和本研究結論相反。

最後兩張表格總結這篇文章的實驗思路和實驗方法

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